ELISA试剂盒这些问题你遇到过几个

　　ELISA实验中常见的问题您知道吗？如果您是新手小白，恭喜您看到这篇文章，这篇ELISA实验干货请您收好了！

　　一、剩余的试剂盒材料要妥善保存

　　标准品分装后按说明书要求的温度保存，这样可以避免污染，对要求冷冻保存的标准品还可以避免反复冻融；酶标板放回锡箔纸袋，加入干燥剂，封紧封口，4℃保存。忌未将酶标板*平衡至室温，就放回锡箔纸袋，因为此时由于温度差，酶标板上会有水汽，不利于稳定保存。

　　二、预实验：通常预实验包括全部标准曲线和小量样本。

　　预实验有两个主要目的，一来是熟悉实验流程，发现可能忽略的问题；二来是测试样本和试剂盒是否匹配，一旦出现不匹配的情况，不至于浪费过多样本。另外是对样品中目的分析物的丰度作一下大致了解，以确定合适稀释度。

　　三、加样要快速，避免气泡

　　加样时间宜控制在 15 分钟内。加样前要将样本混匀，特别是冻存后融化的样本（自然融化的血清等样本会有分层现象），应上下颠倒充分混匀，注意动作轻缓，避免产生气泡。如冻存融化后的样本有沉淀，可以再次离心。整个加样过程都要注意避免产生气泡。气泡会影响蛋白的相互结合，而影响反应进行。

　　四、孵育时要保证温度均匀，防止挥发变干

　　孵育时压紧封口膜。多块板一起实验时，要平放各板，不要叠放，以免因温度不均造成漂移或边缘效应。

　　五、手动洗板的操作指南

　　加洗液要快速，没有多道移液器可以使用洗瓶。洗液应新鲜配制，以免被其他试剂污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水纸上拍板，选用无粉尘和碎屑的吸水纸。需要用力拍板，使孔内没有可见液体挂壁；但也不能太重，不能让样品干太久。酶标板拍干后立即做后续的加液。

　　六、显色反应的关键点

　　ELISA试剂盒实验是个酶促底物显色反应，随时间增加，显色变深，所以选择佳时间终止反应是得到的标准曲线和样本浓度的重要因素。终止过程要*。使用的 TMB 底物时*终止点是黄色，不会有任何程度的蓝色或绿色，终止过程中必要时可以震荡96孔板，或用枪头抽吸混匀（终止液含强酸，避免腐蚀）。