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本试剂盒仅供研究使用。
使用目的
本试剂盒用于测定山羊血清、血浆及相关液体样本中布鲁氏菌病（Brucellosis）的含量。
实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中山羊布鲁氏菌病（Brucellosis）水平。用纯化的山羊布
鲁氏菌病（Brucellosis）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已
知浓度的布鲁氏菌病（Brucellosis）标准品和未知浓度的布鲁氏菌病（Brucellosis）待检样品，
温育后，加入生物素标记的抗 IgG 抗体，再与链霉亲和素-HRP 结合，形成免疫复合物，经
过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转
化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的布鲁氏菌病（Brucellosis）呈正相关。用酶标仪在
450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中山羊布鲁氏菌病（Brucellosis）
浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液
20ml×1 瓶
标准品 S1（160pg/ml）
0.5ml×1 瓶
2 链霉亲和素-HRP
6ml×1 瓶
标准品 S2（80pg/ml）
0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板
12 孔×8 条
标准品 S3（40pg/ml）
0.5ml×1 瓶
4 生物素标记的抗-IgG 抗体
6ml×1 瓶
标准品 S4（20pg/ml ）
0.5ml×1 瓶
5 显色剂 A 液
6ml×1 瓶
8
标准品 S5（10pg/ml）
0.5ml×1 瓶
6 显色剂 B 液
6ml×1/瓶
9
说明书 1 份
7 终止液 6ml×1 瓶
10
封板膜
2 张
标本要求
1．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作步骤
1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复
孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样
品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50µl，在样本反应孔中加入 50 微升样本，盖上封
板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育 45 分钟。
3. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 4 次，拍干。
5. 加生物素标记的抗-IgG 抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50µl。37℃温育 30 分
钟
6. 洗涤：操作同 4。2
7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入 50µl 的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30
分钟。
8. 洗涤：操作同 4。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50µl，再加入显色剂 B 50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其性，以避免试验误差。一次加样时间醉好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔地一孔的 OD 值），请先将样本
稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以稀释倍数（×5×n）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂 B 请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
线性范围6.0pg/ml-160pg/ml
规格96 人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月
