你未必知道的ELISA实验秘诀

　　你未必知道的ELISA实验秘诀 

　　只有不断学习与实验才能逐渐积累经验，做出更好的实验效果。在前面的资讯内容及技术文章中，为大家分享许多ELISA试剂盒的操作技巧、要求、方法等相关技术，我公司技术员根据自身多年【ELISA试剂盒实验】经验，整理出新的ELISA操作技巧。下面我们一起来看下具体内容，你未必知道的ELISA实验秘诀：

　　1.加样后及时放人孵箱，标本较多时，要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

　　2.显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

　　3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

　　4.合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

　　5.液体全部加入酶标孔后，zui好将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s，使液体充分混合均匀，也使其得到充分的反应。

　　6.洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

　　7.吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

　　8.要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。

　　9.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

　　10.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液。

　　11.作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

　　12.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

　　13.样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。

　　14.剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

　　15.不同批号试剂组分不得混用。

　　16.ELISA试剂盒实验洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

　　17.用于检测的样品应保持新鲜。

　　18.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

　　19.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

　　20.要确保微量加样器的准确性，可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质，温度环境为20%左右时，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其zui高量程和zui低量程进行确定。

　　21.在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品溶液。

　　22.吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，吸取的量不够准确。

　　23.将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孑L壁接触，液滴会自然流下去。吸入液体时的zui好的方法是吸两档打一档，防止由于枪头的毛细作用使得部分液体不能流出而造成的误差。

　　24.吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸，减少误差。

　　25.实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出，使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同，酶标板只要取出所需量。

　　26.由于底物显色剂对光及其敏感，因此要避光保存。

　　27.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

　　28.检测吸光度前应将酶标仪打开，将其预热30min以上。

　　29.底物为TMB，避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性，应尽量避免接触皮肤。

　　30.孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。

　　31.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。

　　32.没有去离子水或双蒸水时，可以使用纯净水配制溶液，切勿使用自来水。