大鼠ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法

　　大鼠ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法

　　1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

　　3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　试剂的准备

　　标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。

　　2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

　　操作步骤

　　1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

　　2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。大鼠ELISA试剂盒每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

　　4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

　　6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

　　8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

　　9．在450nm波长处测定各孔的OD值。